Responsable de la elaboración de este Protocolo:
MSc.
Dagmara Plana Ramos, Laboratorio de Biotecnología del Departamento de Genética
y Mejora de las plantas- Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas.
email:
dagmara@inca.edu.cu
Especie:
Nombre científico: Lycopersicon esculentum ,Mill
Nombre
común: tomate
Vía de
regeneración: Organogénesis directa
Establecimiento
de los cultivos:
a)
Explante
utilizado
Sección del embrión que contiene la parte próxima del
hipócotilo de semillas precultivadas en agua destilada y estéril durante 48
horas
b) Desinfección
del explante:
Las semillas fueron lavadas previamente con Tween
80% durante 20 minutos, y lavadas posteriormente con agua estéril. Seguidamente dentro de la cámara de flujo laminar, en hipoclorito de sodio al 3 % de cloro activo
durante 10 minutos y se lavan tres veces en agua destilada estéril.
c)
Medio de
cultivo para el establecimiento:
Base salina de Murashige y Skoog, 1962 (MS), Mio-Inositol
100 mg.L-1, Tiamine 4 mg.L-1, Azúcar comercial 30 g.L-1. Después de ajustar el pH a 5.8 con hidróxido de
sodio 0.1 M, se agrega 2g.L-1 de agar.
Base salina de Murashige y Skoog, 1962 (MS), Mio-Inositol 100 mg.L-1, Tiamine 4 mg.L-1, Azúcar comercial 30 g.L-1; sin reguladores del crecimiento. Después de dos semanas de cultivo se contó el número de explantes con brotes regenerados.
e) condiciones de incubación: En cámara climatizada a 25 ± 2 ºC con un fotoperíodo de 16 horas y una
intensidad lumínica de 65 µM.m-2.s-1.
a) Explante:
callo
de cicatrización desarrollado
b) Medio
de cultivo: Base salina de Murashige y Skoog ,
1962 (MS), Mio-Inositol
100 mg.L-1, Tiamine 4 mg.L-1, Azúcar comercial 30 g.L-1; sin reguladores del crecimiento.
c) Condiciones de incubación: En cámara climatizada a 25 ± 2 ºC con un fotoperíodo de 16 horas y una
intensidad lumínica de 65 µM.m-2.s-1.
Enraizamiento:
a) a) Medio de cultivo: MS, sin reguladores del crecimiento.
b) b) condiciones de incubación : en cámara
climatizada a 25 ± 2 ºC con un fotoperíodo
de 16 horas y una intensidad lumínica de 50 µM.m-2.s-1.
Aclimatación:
Las plantas completas son mantenidas 24
horas en el mismo recipiente de cultivo, con el medio de cultivo sin la
cobertura, en la cámara climatizada con iguales condiciones de luz y
temperatura. Posteriormente, el agar
del medio de cultivo es lavado y las plantas se trasplantan a macetas con una
mezcla de suelo y Litonita (1:1). Las macetas son colocadas en invernadero.
Rendimiento de este protocolo: datos de
eficiencia,
Respuesta
variable en función del genotipo.
Observaciones:
Bibliografía:
§
Radisensibilidad
a rayos gamma 60Co en callos de tomate (Lycopersicon esculentum, Mill) variedad Amalia./ Marta Alvarez,
Jesús Rodríguez, Dagmara Plana y Nancy Santana. Cultivos Tropicales
20(4): 35-39, 1999.
§
Métodos de
cultivo y acción de nuevos reguladores del crecimiento en la morfogénesis in
vitro del tomate (Lycopersicon eculentum
Mill), cultivar Amalia. Tomate / Dagmara Plana, Marta Alvarez, tutora/
Tesis de Maestría. Fondo ICT. INCA, La Habana, 2000.
§
Tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) plant regeneration in absence of
exogenous growth regulators. Plana,
D., Alvarez, M., Florido, M., Lara,
R.M., Moya, C.
Tomato Genetics Cooperative Report. 51: 29-30, 2001.
§
Estudio morfológico, histológico,
bioquímico y citogenético de la regeneración in vitro del tomate (Lycopersicon
esculentum, Mill). Dagmara Plana,
Marta Álvarez, Marilyn Florido, Regla M. Lara y Carlos Moya. Taller internacional de Biotecnología
Vegetal, BIOVEG 2001. p. 67, ISBN 959-16-0075-5.Cuba.
§
Análisis isoenzimatico para detectar variabilidad y/o
estabilidad in vitro en cultivos de
importancia económica. Regla M. Lara,
Marilyn Florido, Dagmara Plana, Olivia Moré, María R González, María M Hernández. Cultivos Tropicales 24(2), 2003.
§
A new in vitro regeneration protocol
in tomato (Lycopersicon esculentum, Mill).
Dagmara Plana, Marta Álvarez, Marilyn Florido, Regla M. Lara y
Carlos Moya. Cultivos Tropicales 26 (2), 2005 (en edición).
Pagina web del laboratorio o del autor
www.inca.edu.cu