Responsable
de la elaboración de este Protocolo:
Ing. Ariannys Roque López
Institución: Centro Universitario de Las Tunas (CULT) – Universidad Agraria
de La Habana (UNAH)
Laboratorio: Biotecnología Vegetal
Teléfono: 4-8014 ext. 17
e-mail: ariannysrl2001@yahoo.es
ariannys@isch.edu.cu
Ciudad: Las Tunas y La Habana
País: Cuba
Especie: Carica papaya L., papaya, cv Maradol Roja
Vía de regeneración:
- Organogénesis directa
Establecimiento de los cultivos:
a) Explante utilizado
§
Segmentos
nodales
§
Plantas
jóvenes de 2 meses de edad en casa de cultivos, con un tamaño de 15-20 cm
de altura, tomar los primeros 8 segmentos nodales. Las plantas madres deben
estar en bolsas de polietileno (23.00 cm x 8.00 cm) con una mezcla de suelo
Ferralítico Rojo Típico y cachaza (4:1).
b) Desinfección del explante:
Colocar fracciones del tallo
con 10 cm de tamaño desde el ápice hasta la base, eliminar hojas, lavar con
agua y detergente, cepillar, enjuagar con agua destilada, agitar 1 mimuto
en alcohol 70%, ejuague con agua destilada estéril, 24 horas en NaOCL 0.1%
+ 4 gotas de TWEEN 80, enjuague con agua destilada esteril, 30 minutos NaOCL
0.01% + 4 gotas de TWEEN 80, últimos 15 minutos en cabina de siembra, enjuague
con agua destilada estéril, inmersión en sulfato de gentamicina 4 horas, tres
enjuagues con agua destilada estéril, corte de segmentos nodales a 0.5 cm
e implantación.
c) Medio de cultivo para el establecimiento : Murashige y Skoog (1964) MS modificado con el incremento del doble de
la concentración de IK.
e)
Condiciones de incubación:
Temperatura:
27+2 oC
FFF: 50.62.5 mmol
m-2 s-1, y un fotoperíodo de 16 h
a) Explante: Segemento nodal
b) Medio de cultivo:
MS modificado con el incremento del doble de la concentración de IK, Agar
7g.L-1, sacarosa 30 g.L-1, pH: 5.8
Hormonas: 0.5 mg.L-1
Kinetina + 1.0 mg.L-1 GA3
c)
Condiciones de incubación:
Temperatura: 27+2 oC
FFF: 50.62.5 mmol
m-2 s-1, y un fotoperíodo de 16 h
Enraizamiento:
a) Medio de cultivo:
Subfase 1: MS modificado con
el incremento del doble de la concentración de IK, Agar 7g.L-1,
sacarosa 30 g.L-1, pH: 5.8
Hormonas: 2.0 mg.L-1 AIB
Duración
de la subfase: 30 días
Subfase 2: MS modificado con
el incremento del doble de la concentración de IK, sacarosa 30 g.L-1,
pH: 5.8
Hormonas: NO
Duración
de la subfase: 30 días
b) Condiciones de incubación
Temperatura: 27+2 oC
FFF: 50.62.5 mmol m-2 s-1, y un fotoperíodo de 16 h
Aclimatación:
Plantas con 2-3 cm de altura y 3-4 hojas, lavar
con agua destilada, sumergir en una solución de Ridomil al 1 % (25 % PH) durante
30´ para evitar la contaminación fúngica, colocar en suelo y materia orgánica
30 % y suelo y materia orgánica 60 %.
Esterilizar
el suelo (Ferralítico Rojo típico) con formol al 10 % y preparar mezclas con materia orgánica (cachaza) Las características
del suelo y la cachaza como fuente de materia orgánica se muestran en las
tablas 1 y 2.
Tabla 1. Características químicas del suelo Ferralítico
Rojo típico empleado para la aclimatización de las plantas de papaya cv Maradol
Roja
| Suelo |
Textura % |
%MO |
P2O5
(mg/100g) |
K2O (mg/100g) |
pH (H2O) |
pH (KCL) |
Ca
(meq/kg) |
Mg
(meq/kg) |
CIC |
CCB |
C/N |
|
Ferralítico Rojo típico |
72.68 |
2.09 |
16.08 |
9.61 |
6.7 |
5.7 |
15.81 |
3.35 |
22.7 |
20.6 |
11.6 |
Tabla 2. Características químicas de la cachaza
como fuente de materia orgánica empleada para la aclimatización de las plantas
de papaya cv Maradol Roja
| Materia orgánica |
%C |
%MO |
%N |
C/N |
P |
K |
Ca |
Mg |
|
Cachaza (CAI “Héctor Molina”) |
7.48 |
12.9 |
0.64 |
11.69 |
4.58 |
2.38 |
201.5 |
29.06 |
Las
plantas se cubren con una malla sombreadora negra, la que logra una reducción
de la intensidad luminosa del 70 %, con la que se debe alcanzar un valor de
1959 Lux a las 12:00 M del día en el mes de octubre, período en que se debe
realizar la aclimatación de la papaya cv Maradol Roja para ser llevada a campo
en los meses de noviembre a enero,
por ser la época más recomendada para evitar mayor incidencia de las plagas.
La
humedad necesaria se debe asegurar con el empleo de microaspersores mediante
el sistema de microjet, con una entrega final de 1.0 -1.5 L/m2
por riego de dos minutos, y la frecuencia de 8 riegos diarios. Bajo estas
condiciones se debe lograr una humedad relativa de aproximadamente de 85 -
90 %. Emplear bandejas de polieturano con 70 orificios. Las plantas después
de 30 días se trasplantan a bolsas (23.00 cm x 8.00 cm) y luego al campo
Rendimiento de este protocolo:
Coeficiente de multiplicación medio: 1.92 hasta
12 subcultivo
Plantas por cada 100 explantes implantados en 12 meses: 250965.86
Eficiencia real – 3% de pérdida: 243437 plantas a
los 12 meses por cada 100 explantes implantados.
Observaciones:
Se puede sustituir alternativamente la kinetina por Biobras-
6 (BB-6) hasta el subcultivo 8 a:
Establecimiento: 0.01 mg.L-1 BB-6
Subcultivos: 0.01 mg.L-1 BB-6 y 1.0 mg.L-1 GA3
Bibliografía:
3.
Roque,
A. L.; Héctor, E. A.; Vento, H. D.; Torres, A. G. 2002. Efecto de diferentes concentraciones y
combinaciones hormonales en la multiplicación in vitro de papaya (Carica papaya
L.). En el Anuario Electrónico de la UNAH. ISBN: 16-0167-0. Pág.1-12.
Nov. / 2002.
6.
Vargas, D. B., Roque, A.
L y Héctor, E. A. 2002.
Empleo de la técnica AFLP para determinar la estabilidad de plantas de fruta
bomba (C. Papaya, cv Maradol Rojo), durante la micropropagación. En:
Congreso Científico del INCA (13: 2002, nov 12-15, La Habana) Memorias.
CD-ROM. Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas, 2002. ISBN 959-7023-22-9.
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o del autor