PROTOCOLOS REDBIO/FAO
Micropropagación de plantas
Responsable
de la elaboración de este Protocolo: Vilma
Cecilia Conci, INTA-IFFIVE, Camino 60 cuadras km 5,5 (5119) Córdoba,
Argentina. TE: 0351-4973636
FAX: 0351-4974330 e-mail:
vconci@correo.inta.gov.ar
Especie: Allium sativum
(ajo)
Vía de regeneración:
Especificar: Organogénesis directa
Establecimiento de los cultivos:
a) Explante
utilizado
§
Especificar: meristema (constituido por el domo más 1 primordio foliar (0,3 mm
aproximadamente). Hacer la extracción a partir de bulbillo (diente)
despierto.
b) Desinfección del explante: para la extracción del meristema se
corta un trozo de tejido en forma cúbica, incluyendo el disco basal donde
está el meristema. Este se desinfecta mediante una inmersión en alcohol
70% y luego con hipoclorito de Na al 5 % durante 10-15 min.
Posteriormente el trozo de tejido es colocado sobre papel estéril bajo
una lupa estereoscópica dentro de una cámara de flujo laminar y con la
ayuda de instrumental estéril se procede a la extracción del explanto.
Luego de la escisión el explanto debe ser rápidamente sembrado en medio
de iniciación donde se desarrollará una planta completa.
c) Medio de cultivo para el
establecimiento :
Soluciones madre (Murashige
and Skoog, 1964)
Compuestos Orgánicos
Thiamina..................................0,4
mg/l
Inositol.....................................100
mg/l
Acido
Nicotínico.......................0,5 mg/l
Piridoxina..................................0,5
mg/l
Glicina...........................................2
mg/l
Sulfato
de Adenina...................80 mg/l
Agar............................................6-7
mg/l
pH: 5,7
Medio
de Iniciación (meristema)
Soluciones Madre y
compuestos orgánicos
Sucrosa:
30 g/l
Hormonas:
AIA......................0,1 mg/l
Cinetina................0,1
mg/l
e) condiciones
de incubación: 21 C
Subcultivo:
a) Explante: plántula
b)
Medio de cultivo
Medio
de Multiplicación
Soluciones Madre y
compuestos orgánicos
Sucrosa:
30 g/l
Hormonas:
2ip.........................3 mg/l
ANA.....................0,30
mg/l
c) Condiciones
de incubación: 23-25 C
Enraizamiento:
a) Medio de
cultivo: en el mismo medio de
cultivo.
b) condiciones
de incubación: 23-25 C
Rusticación y transplante ex vitro
Después de varios ciclos in vitro, muchas plantas
bulbifican espontáneamente y otras deben ser inducidas. Repicando los
plantines a un medio sin hormonas, con alto contenido de sacarosa y luz
continua se consigue mejorar el porcentaje de bulbificación en algunos clones, o bien, se obtienen
plantas más robustas que soportan el transplante a suelo sin dificultad.
Aclimatación:
Los
minibulbillos obtenidos in vitro
son cosechados y sembrados en suelo estéril compuesto por una mezcla de
tierra/mantillo/arena (1/1/1). Las plantas que no forman bulbos son
transferidas a suelo y mantenidas en cámara húmeda por un tiempo variable
entre 15 y 20 días, luego son paulatinamente adaptadas a las condiciones
naturales de humedad y temperatura.
Rendimiento de este protocolo: datos de eficiencia,
Tasa de multiplicación
variable según cultivar alrededor 1/6 cada 8 semanas.
Observaciones:
Bibliografía:
Conci V. C.;
Cafrune E. E.; Lunello P.; Nome S. y
Perotto C. 2004. Producción
de planas de ajo libres de virus. En Echenique,
V., Rubinstein, C. y
Mroginski, L. (Eds.). Biotecnología y Mejoramiento Vegetal. Parte
VIII, Cap. 6: 313-316. Ediciones INTA, Buenos Aires, Argentina. ISBN
987-521-138-9.
CONCI, V. C. 2004. Obtención de plantas
libres de virus. En Echenique, V.,
Rubinstein, C. y Mroginski,
L. (Eds.). Biotecnología y Mejoramiento
Vegetal. Parte VIII, Cap. 5: 303-312. Ediciones INTA, Buenos Aires, Argentina. ISBN
987-521-138-9.
CONCI,
V.C. 1997. Virus y Fitoplasmas de ajo. In BURBA, J. L. 50 temas sobre
producción de ajo. Vol.
3: 267-293. EEA-INTA La Consulta, Mendoza, Argentina.
CONCI, V.C. y S.F. Nome. 1991. Virus free garlic (Allium sativum L) plants obtained
by thermotherapy and meristem tip culture. J.
Phytopathology 132: 189-192.
MORICONI,D.N.;
V.C.CONCI and S.F.NOME. 1990. Rapid Multiplication of garlic (Allium sativum L.) in vitro. Phyton-International Journal of
Experimental Botany 51 (2): 145-151. ISSN: 0031-9457.
PEROTTO, M. C.; CONCI; V. C.; CAFRUNE, E.
E.; ALOCHIS; P. and BRACAMONTE, R. 2003. Differences in the Response of
Garlic Cultivars to the Eradication of Five Viruses. Phyton-International
Journal of Experimental Botany: 233-240.
Pagina web
del laboratorio o del autor
www.inta.gov.ar/iffive
Llenar y
enviar a secretaria@fundacionredbio.org
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