PROTOCOLOS   REDBIO/FAO

Micropropagación de plantas

 

Responsable  de la elaboración de este Protocolo:

MSc Ing. Agr. María Teresa Ponce. Cátedra de Fisiología Vegetal. Departamento de Ciencias Biológicas. Facultad de Ciencias Agrarias. Universidad Nacional de Cuyo. e-mail: mponce@fca.uncu.edu.ar

Especie:  Glandularia perakii Cov. Et Schn.

Especie nativa ornamental.

 

Vía de regeneración:

 

Organogénesis directa

 

Establecimiento de los cultivos:

 

a)     Explante utilizado

§         Estacas uninodales de 1 a 2 cm de largo.

§         Las plantas madres deben permanecer en invernáculo o cámaras de crecimiento por 20 días previo a la extracción de las estacas. Este procedimiento favorece el alargamiento de tallos y disminuye la lignificación, además de disminuir notablemente las infecciones in vitro.

b)      Desinfección del explante: Las estacas uninodales se deben lavar con agua común y posteriormente colocar en alcohol 70 % por un minuto y luego 10 minutos en lavandina comercial al 15 % (55,5 g.L-1 de cloro activo), se deben enjuagar con agua estéril tres veces en condiciones de acepsia.

c)      Medio de cultivo para el establecimiento :             

     Macronutrientes Murashige-Skoog (1962):

NO3 NH4                    1650 mg.L-1

NO3K                         1900 mg.L-1

SO4 Mg.7H2O           370 mg.L-1

PO4 H2K                    170 mg.L-1

Cl2 Ca.2H2O              440 mg.L-1

EDTA Na2                 37,3 mg.L-1

SO4Fe.7H2O             27,8 mg.L-1

 

Micronutrientes Murashige-Skoog (1962):

BO3H3                        6,2 mg.L-1

SO4Mn. 4H20            22,3 mg.L-1

SO4Zn. 4H20             8,6 mg.L-1

MoO4Na2.2H20         0,25 mg.L-1

SO4Cu. 5H20            0,025 mg.L-1

Cl2Co. 6H20              0,025 mg.L-1

IK                                0,83 mg.L-1

 

Vitaminas Murashige-Skoog (1962)

myo-inositol               100 mg.L-1

tiamina-ClH               0,1 mg.L-1

piridoxina-ClH           0,5 mg.L-1

Ac. Nicotínico            0,5 mg.L-1

Glicina                       2,0 mg.L-1

 

 Adicionado de 20 g.L-1   de sacarosa y 8 g.L-1 de agar agar. pH 6, ajustado antes del autoclavado 20 minutos a 121° C.

d)     Medio básico, hormonas, duración del establecimiento: No requiere agregado de hormonas. El establecimiento in vitro se alcanza a los 20 días.

e)     Condiciones de incubación: temperatura de 24° ± 1 (durante ek periodo de luz), fotoperiodo de 16 horas de luz  fluorescente e intensidad luminosa de 100 μmol.m-2.s-1 .

 

Subcultivo: Esta especie enraíza en el mismo medio de multiplicación.

a)     Explante: estacas uninodales.

b)     Medio de cultivo: Murashige Skoog (1962), 20 g.L-1 sacarosa, 8 g.L-1 de agar agar pH 6.

c)      Condiciones de incubación: temperatura de 24° ± 1, fotoperiodo de 16 horas de luz  fluorescente e intensidad luminosa de 100 μmol.m-2.s-1 .

 

Enraizamiento:

a)     Medio de cultivo:

b)     condiciones de incubación

 

Aclimatación:

La aclimatación debe realizarse en cámaras de vidrio o plásticas. Se pueden utilizar distintos substrato tales como perlita, orujo agotado y arena 8:2 o humus y arena 7:3.  A temperaturas de 20 a 25 ° C  y con 100 % de humedad retoman el crecimiento en 7 a 10 días, posteriormente se puede comenzar a abrir las cámaras paulatinamente, el tiempo necesario para la aclimatación ex vitro es de 20 a 25 días. 

 

Rendimiento de este protocolo: datos de eficiencia,

La tasa de multiplicación es de 7,9 cada 20 días.

Observaciones:

 

Bibliografía:

Marino, C.; Ponce, M.T., Videla M.E., Fioretti, S. and Cirrincione, M.A. 2003. Micropropagation  of Glandularia perakii Cov, et Schn. (Verbenaceae), native species with ornamental potencial.  Biocell 27(1): 57-60.

 

Pagina web del laboratorio o del autor:  www.fca..uncu.edu.ar