Responsable  de la elaboración de este Protocolo:

MSc. Ing. Agr. Mónica Elizabeth Guiñazú. Cátedra de Fisiología Vegetal. Departamento de Ciencias Biológicas. Facultad de Ciencias Agrarias. Universidad Nacional de Cuyo. e-mail: mguinazu@fca.uncu.edu.ar

 

 

Especie:  Mentha arvensis L. var. piperascens Holmes, menta.      

                 (cvs. “Japonesa”,  “Inglesa” y Shivalik”.)

   

 

Vía de regeneración:

-         Organogénesis directa

 

Establecimiento de los cultivos: (en tubos)

a)     Explante utilizado

- Estacas herbáceas uninodales con dos yemas opuestas o extremos apicales obtenidas de plantas jóvenes crecidas en invernáculo.

 

-  Conviene pulverizar las plantas cada 15 días con Captan 2 g.L –1 y Benlate 0,5 g.L–1 . También puede extraerse material directamente de campo durante los meses de crecimiento activo, pero con mayores problemas de infección in vitro.

 

b)      Desinfección del explante:

- Inmersión en una solución de lavandina comercial (55,5 g.L-1 de cloro activo) al 20 % adicionada con 0,04 % de Tween 20, durante 10 minutos (agitando).

- En condiciones de acepsia, enjuagar con agua estéril tres veces.

 

c)     Medio de cultivo para el establecimiento : MS entero

Macronutrientes Murashige-Skoog (1962):

NO3 NH4                    1650 mg.L-1

NO3K                         1900 mg.L-1

SO4 Mg.7H2O           370 mg.L-1

PO4 H2K                    170 mg.L-1

Cl2 Ca.2H2O              440 mg.L-1

EDTA Na2                 37,3 mg.L-1

SO4Fe.7H2O             27,8 mg.L-1

 

Micronutrientes Murashige-Skoog (1962):

BO3H3                        6,2 mg.L-1

SO4Mn. 4H20            22,3 mg.L-1

SO4Zn. 4H20             8,6 mg.L-1

MoO4Na2.2H20         0,25 mg.L-1

SO4Cu. 5H20            0,025 mg.L-1

Cl2Co. 6H20              0,025 mg.L-1

IK                                0,83 mg.L-1

 

Vitaminas Murashige-Skoog (1962)

myo-inositol               100 mg.L-1

tiamina-ClH               0,1 mg.L-1

piridoxina-ClH           0,5 mg.l-1

Ac. Nicotínico            0,5 mg.l-1

Glicina                       2,0 mg.l-1

 

Hormonas

0,01 mg.L-1 de ácido naftalen acético (ANA)

 

Otros

0,01 mg.L-1 de biotina

     30 g.L-1 de sacarosa

7 g.L-1 de agar agar

 

 Ajustar el pH 5,8 antes del autoclavado por 20 minutos a 121 º C.

 

d)     Duración del establecimiento:  20 días.

 

e)     Condiciones de incubación:

Temperatura de 23° ± 1 durante las horas de luz, fotoperiodo de 16 horas de luz  fluorescente e intensidad luminosa de 120 mmol.m-2.s-1 .

 

Subcultivo: (en frascos)

a)     Explante: Estacas uninodales.

 

b)     Medio de cultivo: Se emplea el mismo medio de la introducción en el cual desarrollan brotes y raíces.

 

c)      Condiciones de incubación:

Temperatura de 23° ± 1 durante las horas de luz, fotoperiodo de 16 horas de luz fluorescente e intensidad luminosa de 120 μmol.m-2.s-1.

 

d) Frecuencia de los repiques y tasa de multiplicación:

Se debe repicar cada 30 días y la tasa de multiplicación es de 10 para los cvs. “Inglesa” y “Japonesa” y de 7 para Shivalik.

 

 

Aclimatación:

1-     Luego de retirar las plántulas de los frascos, se lavan las raíces con agua corriente para eliminar el agar y se colocan en bandeja cubierta con plástico para evitar deshidratación.

2-     Posteriormente las plántulas se desinfectan por inmersión en una solución de Captan  2 g.L-1 y Benlate 0,5 g. L-1 .

3-     La plantación puede realizarse en speedling, vasos plásticos o bandelas plásticas según la cantidad de plantas a aclimatar. Como sustrato ha dado buenos resultados la mezcla de alierita:orujo de uva molido:arena 1:1:1 (v:v:v) y la mezcla de orujode uva molido:arena:humus de lombriz en una relación 7:2:1 (v:v:v).

4-     Se mantienen cubiertas con plástico totalmente cerradas y media sombra del 80 % durante 15 días y de allí en más se va levantando el plástico paulatinamente hasta dejarlas descubiertas a los 20 días. Se riegan a la semana con la misma mezcla de fungicidas y a los 15 días con una solución de Murashige y Skoog diluida a la mitad y con la completa a los 20 después del trasplante.

5-     A partir de los 20 días  las plantas pueden pasarse en el invernáculo a una media sombra del 60 % y a los 30 llevarse a campo. El porcentaje de sobrevivenvia es del 100%.

 

Rendimiento de este protocolo: datos de eficiencia,

La tasa de multiplicación durante los subcultivos es de 10 para los cvs. “Inglesa” y “Japonesa” y de 7 para Shivalik, cada 30 días.

 

En la etapa de aclimatación se logra un 100 % de sobrevivenvia. A partir de los 20-22 días de extraerse la plantas de condiciones in vitro, ya quedan totalmente descubiertas y pueden pasarse en el invernáculo a una media sombra del 60 % y a los 30 días  llevarse a campo.

 

 

Observaciones:

 

Bibliografía:

- Martinez, L; Guiñazú, M.E.; Riquelme, C.y Agüero C. 1991. Estudio preliminar de la micropropagación de la manta (Mentha arvensis var. Piperascens Holmes) mediante estacas uninodales y extremos apicales. Simposio Argentino de Biotecnología Vegetal. Vaquerías, Córdoba. Junio 11 y 12. Resumen 70.

 

- Murashige T. & Skoog F. M. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 15:473-479.

 

- Riquelme, C.; Guiñazú, M.E. y Tizio R. 1991. Preacondicionamiento y aclimatación, en condicionesd de invernáculo, de plantas micropropagadas de frutilla, menta, papa y vid. Phyton 52(1):73-82.

 

 

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