Responsable de la elaboración de este Protocolo: Ing. Agr. (MSc)
Graciela Nestares - Laboratorio de
Cultivo in vitro y biología molecular de la Cátedra de Genética – Fac. Cs.
Agrarias – Universidad Nacional de Rosario – E-mail: gnestare@fcagr.unr.edu.ar
Especie: Helianthus annuus L. - girasol
Vía de regeneración: organogénesis directa
Establecimiento de los
cultivos:
a)
Explante utilizado
§
secciones de cotiledones maduros y secciones de cotiledones de plántulas.
§
Las plántulas de las
cuales se extraen los cotiledones deben tener como máximo dos días
posgerminación. Las secciones que más potencial de regeneración presentan son
las basales (próximas al nudo cotiledonar)
b)
Desinfección del explante: 2 segundos en alcohol 70º y 15 minutos en
lavandina comercial al 50%
c)
Medio de cultivo para el establecimiento : base salina de Murashige y Skoog
(1962) + 1 mg/l AIA + 2 mg/l KIN + 200 mg/l glutamina
d)
condiciones de
incubación 30
días a 25±2 ºC con fotoperíodo de 12 hs. y una intensidad lumínica de 50 µM m-2 s-1
a) Explante:
b) Medio de cultivo
c) Condiciones de incubación
Enraizamiento:
a)
Medio de cultivo: medio de cultivo sin
reguladores vegetales
b)
condiciones de
incubación: las mismas arriba detalladas
Aclimatación: se aclimata con las mismas condiciones de la incubación y luego se
trasplantan a macetas en invernadero
con temperatura controlada.
Rendimiento de este protocolo: el
rendimiento es genotipo dependiente. Hay materiales que regeneran muy bien y
otros más recalcitrantes. A su vez se
presentan dificultades como la inducción in vitro de la floración y la
hiperhidricidad de los vástagos regenerados que representan en conjunto
pérdidas del orden del 60% durante el proceso de aclimatación.
Observaciones: El agregado de nitrato de plata al medio de cultivo reduce
significativamente el porcentaje de vástagos hiperhídricos sin afectar la
capacidad de regeneración
Bibliografía:
Nestares,
G.; Zorzoli, R. ; Mroginski, L. and Picardi, L. 1996. Plant regeneration from cotyledons derived
from mature sunflower seeds. Helia 19: 107-112.
Zorzoli, R.; Nestares, G. y Mroginski,
L. 1996. MICROPROPAGACIÓN DE GENOTIPOS DE GIRASOL (Helianthus annuus L.)
POR CULTIVO IN VITRO Y EVALUACIÓN DE LAS FASES DE ACLIMATACIÓN Invest.
Agr.:
Prod. Prot. Veg. 11 (3): 389-396.
Nestares,
G. ; Zorzoli, R. ; Mroginski, L. and Picardi, L. 1998. CYTOPLASMIC EFFECTS ON
THE REGENERATION ABILITY OF SUNFLOWER. Plant Breeding 117: 188-190.
Nestares, G.; Zorzoli, R.; Mroginski,
L. y Picardi, L. 1999. MICROPROPAGACIÓN Y VITRIFICACIÓN EN DOS GENOTIPOS DE
GIRASOL. fyton 65: 107-112.
Nestares,
G.; Mayor, M.L. ; Zorzoli, R.; Mroginski, L. and Picardi, L.A.. 2001. COMBINING
ABILITY OF SUNFLOWER INBRED LINES FOR IN VITRO TRAITS. Helia
24: 17-24.
Nestares,
G.; Zorzoli, R.; Mroginski, L. and Picardi, L.A. 2002. HERITABILITY OF IN
VITRO PLANT REGENERATION CAPACITY IN SUNFLOWER. Plant Breeding
121: 366-368.
Mayor,
M.L.; Nestares, G. ; Zorzoli, R. and Picardi, L. 2003. REDUCTION OF
HYPERHYDRICITY IN SUNFLOWER TISSUE CULTURE. Plant Cell Tissue & Organ Culture 72: 99-103.
Pagina web del laboratorio o del autor ----