Responsable de la elaboración de este Protocolo: Lucía Díaz. Facultad de Agronomía y Zootecnia. Laboratorio de Cultivos de Tejidos Vegetales de la Cátedra Caña de Azúcar. ldiaz@faz.unt.edu.ar, luciapdiaz@yahoo.com

Especie: Saccharum sp. cv. CP 65-357.

Vía de regeneración:

- Organogénesis directa

Establecimiento de los cultivos:

a) Explante utilizado

§ Meristema apical con dos a tres primordios foliares. Se extrae de plantas de campo, de 9 meses de edad. Se corta el extremo apical de la planta, se elimina el cogollo y se deja un trozo de 20 cm de longitud. En laboratorio se eliminan las hojas externas y se deja un trozo de aprox. 8 cm que contiene el meristema rodeado por hojas sin expandir, sobre el que se hace la desinfección.

b) Desinfección del explante: Se enjuaga con agua jabonosa y desinfecta superficialmente con hipoclorito de sodio al 10% 15 minutos. Se enjuaga con agua estéril tres veces.

c) Medio de cultivo para el establecimiento Murashige y Skoog (1962) modificado: caseína hidrolizada (1 g/l); extracto de levadura (1 g/l); ácido giberélico (0,5 mg/l); IBA (1 mg/l); ácido cítrico (100 mg/l); agua de coco (5%); sacarosa (30 g/l).

d) condiciones de incubación: se realiza en medio líquido sobre puente de papel de filtro. Se agita diariamente durante una hora. Cada 24 hs. Se transfiere a medio fresco. A partir del día 10 los cambios de medio se realizan cada 6 días. 26± 2ºC, luz continua, intensidad 1000 lux. Duración del establecimiento: 3 meses.

e) Cuando los vástagos alcanzan 1,5 cm de longitud los vástagos se transfieren al medio: Medio de intermedio antes de pasar a la etapa de multiplicación: Medio de cultivo para el establecimiento: Murashige y Skoog (1962) modificado: caseína hidrolizada (1 g/l); extracto de levadura (1 g/l); cinetina (0,1 mg/l); IBA (1 mg/l); ácido cítrico (100 mg/l); agua de coco (5%); sacarosa (30 g/l); agar (5g/l). Los repiques se realizan cada 5 días.

Multiplicación:

a) Explante: vástagos de 4-5 cm de altura

b) Medio de cultivo: Murashige y Skoog (1962) modificado: caseína hidrolizada (1 g/l); extracto de levadura (1 g/l); BAP (0,3 mg/l); cinetina (1 mg/l); ácido cítrico (100 mg/l); agua de coco (10%), agar (8 g/l), sacarosa (30 g/l).

c) Condiciones de incubación: 26±2ºC, fotoperiodo 16 hs de luz, intensidad 2000 lux

Enraizamiento:

a) Medio de cultivo: Murashige y Skoog (1962) modificado: caseína hidrolizada (1 g/l); extracto de levadura (1 g/l); cinetina (0,2 mg/l); ANA (3 mg/l); ácido cítrico (100 mg/l); agar (8 g/l), sacarosa (50 g/l).

b) condiciones de incubación: 26±2ºC, fotoperiodo 16 hs de luz, intensidad 2000 lux

Aclimatación:

Las plantas que alcanzan de 8 a 10 cm en condiciones in vitro son llevadas a invernáculo, donde permanecen durante 10 días en cámara húmeda y media sombra 50%. Se colocan en bandejas con sustrato estéril: mezcla de tierra y madera descompuesta (3:1). La etapa dura 45 días.

Rendimiento de este protocolo: datos de eficiencia. Etapa de establecimiento: supervivencia 55.9 %. Tasa de multiplicación: 1:19. Enraizamiento: 61% de las plantas presentan de 40 a 50 raíces por planta.

Observaciones: los protocolos de caña de azúcar de ajustan de acuerdo al cultivar. Es decir algunos pueden crecer mejor en medio líquido estacionario en todas las etapas. Para evitar la oxidación de los explantos en el establecimiento se aconseja colocarlos en oscuridad durante la primera semana.

Bibliografía:

L. P. Díaz; P. A. Digonzelli, E. A. Cerrizuela y A. M. Portas de Zamudio. 1997. Micropropagación de la variedad de caña de azúcar CP 35-357. Revista Agronómica del Noroeste Argentino. Vol XXIX (1-2): 31-41.

Pagina web del laboratorio o del autor: www.manant.unt.edu.ar