Responsable de la elaboración de este Protocolo:
Dra. Roxana Zorzoli, Laboratorio de
Cultivo in vitro y biología molecular
de la Cátedra de Genética -Facultad de Ciencias Agrarias – Universidad Nacional
de Rosario (UNR), e-mail: rzorzoli@fcagr.unr.edu.ar
Especie:
Nombre científico: Lycopersicon ssp. (L.
esculentum Mill.; L. esculentum
var. cerasiforme (Dun.); L. pimpinellifolium (Jusl.) Mill.; L.
peruvianum (L.) Mill.
Nombre
común: tomate
Vía de
regeneración: Organogénesis indirecta
Establecimiento
de los cultivos:
a)
Explante
utilizado
·
Secciones de la tercera hoja más
cercana al ápice.
·
Las semillas de las plantas donadoras
de explantos se siembran en invernadero. Cuando las plantas alcanzan 15
centímetros de altura (40 días después de la emergencia aproximadamente y con 5
hojas expandidas) se efectúa la extracción del explanto. Los explantos foliares
son cortados con bisturí en 6 secciones de similar tamaño.
·
b)
Desinfección del explante: En
alcohol 96 º durante 5 segundos y luego en hipoclorito de sodio al 4 % de cloro
activo durante 4 minutos. Se lavan tres veces en agua destilada estéril dentro
de la cámara de flujo laminar y se cultivan con el envés en contacto con el
medio
c)
Medio de cultivo para el establecimiento: Base salina de Murashige y Skoog (MS), con 0.175 mg.l-1 de
ácido indol-acético y 2.25 mg.l-1 de 6-bencil-amino-purina. Después
de ajustar el pH a 6 con hidróxido de sodio 0.1 M, se agrega 9 g.l-1
de agar.
e)
condiciones de
incubación: En cámara climatizada a 25 ± 2 ºC con
un fotoperíodo de 16 horas y una intensidad lumínica de 50 µM.m-2.s-1.
a) Explante:
b) Medio de cultivo
c) Condiciones de incubación
Enraizamiento:
a) Medio de cultivo: MS sin reguladores vegetales
b) condiciones de incubación : en cámara
climatizada a 25 ± 2 ºC con un fotoperíodo
de 16 horas y una intensidad lumínica de 50 µM.m-2.s-1.
Aclimatación:
Las plantas completas son mantenidas 24
horas en el mismo tubo de ensayo con el medio de cultivo sin la cobertura de
PVC. Así se comienza el proceso de aclimatación de la parte aérea de la planta.
Posteriormente, el agar del medio de cultivo es lavado y las plantas se
mantienen en agua por período de 48 a 72 horas para mayor expansión del sistema
radicular. Esos pasos se realizan en el mismo cámara climatizada donde se
efectuó la incubación. Pasado ese período se trasplantan a macetas con tierra
en invernadero.
Rendimiento de
este protocolo: datos de eficiencia,
Respuesta
variable en función del genotipo
Observaciones:
Bibliografía:
Zorzoli, R.; Cointry, E.; Prado, E.; Mroginski, L. y Picardi, L. - Regeneración de plantas de tomate (Lycopersicon esculentum) por cultivo in vitro de folíolos - Turrialba Vol 38 Nº 4: 332-336 (1988) Editorial IICA (Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura) - ISSN 0044 - 4360
Zorzoli, R.; Bueno, M. y Picardi , L. - Regeneración in vitro a partir de anteras y folíolos de Lycopersicon esculentum - Hort. Arg. 8-12 (18-32): 1-7 (1989/1993) Editotial ASAHO - ISSN 0326 - 4394
Zorzoli, R.; Cointry, E.; Prado, E.; Mroginski, L. y Picardi, L. - Influencia del citoplasma sobre la capacidad de regeneración in vitro en híbridos y sus generaciones segregantes en tomate (L. esculentum Mill.) - Agriscientia Vol IX Nº 2: 15-19 (1992) Editorial Facultad de Cs. Agropecuarias de la U.N de Córdoba - ISSN 0327 - 6244
Pratta, G.; Zorzoli, R. and Picardi, L.A. - Intra and interspecific variability for in vitro culture response in Lycopersicon - Brazilian Journal of Genetics 20(1): 75-78 (1997) Editorial Sociedad Brasileira de Genética - ISSN 0100 - 8455
Pratta, G.; Zorzoli, R. y Picardi, L.A. - Obtención y micropropagación de híbridos intra e interespecíficos en el género Lycopersicon (tomates) - Biotecnología Aplicada 16: 242-245 (1999) Editorial Elfos Scientiae - ISSN 0864 - 4551
Pratta, G.; Cánepa,
L.; Zorzoli, R. and Picardi, L.A. Diallel analysis of in vitro culture traits
in the genus Lycopersicon. HortScience
38 (1): 110 -112 (2003) Editorial
ASHS (American Society for Horticultural Science) - ISSN 0018 - 5345
Pagina web del laboratorio o del autor
www.fcagr.unr.edu.ar