Responsable de la elaboración de este Protocolo:
Hompanera, Norma R.
Instituto de Recursos
Biológicos, INTA, Castelar
Especie: Solanum andígena ssp.andigenum (Papa andina)
Vía de regeneración: Organogénesis
directa
Establecimiento de los
cultivos:
a) Explante utilizado
§
Yemas menores a 0.5 mm
(meristemas), que se disectan de yemas apicales o laterales provenientes de plantas desarrolladas a partir de
tubérculos plantados en invernáculo.
b) Desinfección
del explante: alcohol 70º, 30 segundos e Hipoclorito de sodio 2%, 7
minutos.
c) Medio de
cultivo para el establecimiento:
Medio
básico de Murashige and Skoog (1962)
Kinetina
0.04 mg/l
Ac.
Giberélico 0.1 mg/l
Sacarosa
25 g/l
Agar-Agar:
7,5 g
pH: 5,7 previo a la adición del agar.
En cámara a 25 ºC, fotoperíodo 12 horas, Luz indirecta, aproximadamente 7 días.
Posteriormente, se repica, el medio que se utiliza, es el mismo que para el subcultivo
e)
a) Explante: segmentos
nodales con 2-3 nudos
b)
Medio de cultivo
Medio
básico de Murashige and Skoog (1962)
Sacarosa
30 g/l
Agar-Agar:
7,5 g
b)
c) Condiciones de incubación: 20 º C, fotoperíodo
8 hs luz, 3000 lux.
Enraizamiento: al cabo de un mes, en el medio de subcultivo
y en las condiciones de incubación señaladas
se obtienen plántulas, con un muy buen desarrollo de raíces.
Aclimatación:
(procedimiento)
1- Extraer la plántula del tubo y lavar raíces para
eliminar restos de agar
2- Plantar en macetas con sustrato 3:1 tierra-turba. El
sustrato fue autoclavado a ½ atmósfera
durante 2 hs. y aireado antes de usar)
3- Colocar en cámara, con alta humedad relativa (90%),
12 hs.luz y alta intensidad (6000 luz).
Temperatura 20ºC
Rendimiento de este
protocolo: datos de eficiencia, prácticamente 100 % en todas las etapas
Observaciones:
-Como nuestro objetivo es la conservación in vitro,
cabe señalar que iniciamos los cultivos a partir de la técnica de meristemas, para asegurar una
mayor sanidad de los materiales y una vez logrado el establecimiento de los
explantos, tratamos de no incluir hormonas, muchas veces en detrimento de una
tasa mas alta de multiplicación.
Bibliografía: Este
protocolo no fue publicado. Basado en lo publicado en el Manual de Capacitación, CIP, 1998, con pequeñas
modificaciones, por ejemplo en medio de
propagación y/o enraizamiento no utilizamos ac. giberélico
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