PROTOCOLOS REDBIO/FAO

Micropropagación de plantas

Responsable de la elaboración de este Protocolo: MEDINA, Ricardo Daniel. Instituto de Botánica del Nordeste, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del Nordeste, Sargento Cabral 2131, Casilla de Correo 209. E-mail: ricardomedina@agr.unne.edu.ar

Especie: Manihot esculenta Crantz, mandioca.

Vía de regeneración:

- Embriogénesis somática indirecta

Establecimiento de los cultivos:

a) Explante utilizado:

§ Hojas inmaduras de no más de 5 mm de longitud.

§ Los explantes se obtuvieron a partir de plantas micropropagadas en el medio MS (Murashige and Skoog, 1962) adicionado con con 0,01 mg/L de ácido naftalenacético (ANA), 0,01 mg/L de 6-bencilaminopurina (BA) y 0,1 mg/L de ácido giberélico (AG₃).

b) Desinfección del explante: -.

c) Medio de cultivo para el establecimiento: -.

d) Medio básico, hormonas, duración del establecimiento Los explantes fueron cultivados en tubos de vidrio de 12 mL, conteniendo 3 mL del medio de inducción: MS + 2% de sacarosa adicionado con los reguladores de crecimiento 2,4 diclorofenoxiacético (2,4-D), ácido 4 amino 3,5,6 tricloropicolínico (Picloram) ó ácido-o-anísico (Dicamba). Los explantes fueron mantenidos en el medio de inducción durante 30 días.

e) condiciones de incubación: Los cultivos fueron incubados en un cuarto oscuro climatizado a 27±2 ºC.

Subcultivo:

a) Explante: Embriones somáticos.

b) Medio de cultivo: medio de maduración y conversión a plantas: MS + 0,1 mg/L de BAP + 0,01 mg/L de 2,4-D (Stamp y Henshaw, 1987).

c) Condiciones de incubación: los cultivos fueron incubados en un cuarto climatizado a 27±2 ºC y 14 hs de fotoperíodo (150 µmol.m^-2.s^-1, provistos por lámparas fluorescentes blancas).

Enraizamiento:

a) Medio de cultivo: -.

b) condiciones de incubación -.

Aclimatación:

Las plantas obtenidas fueron transplantadas en macetas, permaneciendo durante 14 días en el cuarto climatizado a 27±2 ºC y 14 hs de fotoperíodo (150 µmol m^-2 s^-1, provistos por lámparas fluorescentes blancas). Posteriormente las macetas fueron transferidas a un invernadero.

Rendimiento de este protocolo: datos de eficiencia:

Fue posible obtener embriones somáticos en 11 de los 12 clones ensayados. Los mejores medios fueron MS + 2 % de sacarosa + 6 mg/L de 2,4-D (3-50% de explantes con embriones somáticos en 9 de 12 clones) ó 10 mg/L de Picloram (3-50% de explantes con embriones somáticos en 9 de 12 clones). El único medio con el cuál fue factible regenerar embriones somáticos del clon Palomita fue MS + 2 % de sacarosa + 10 mg/L de Dicamba. El porcentaje de germinación de los embriones somáticos varió entre 2-50 % y la conversión a plantas entre 2-30 %. Se obtuvieron plantas completas en cuatro clones (MCol 1505, 76, 30 y MPar 75), las que fueron transferidas exitosamente al suelo.

Observaciones:

El número cromosómico (2n=36) y los zimogramas de 8 sistemas isoenzimáticos de las plantas regeneradas permanecieron estables respecto del material original.

Bibliografía:

Medina, R. D., M. M. Faloci, Solís Neffa V. y L. A. Mroginski. 2003. Embriogénesis somática y regeneración de plantas de mandioca (Manihot esculenta Crantz) de cultivares de interés para Argentina. Revista de Investigaciones Agropecuarias del INTA 32 (3), 143-160. Revista indexada, Latindex.