Responsables
de la elaboración de este protocolo: María
Laura Vidoz
Instituto
de Botánica del Nordeste (IBONE), Facultad de Ciencias Agrarias (UNNE), Casilla
de Correos 209, 3400 Corrientes, Argentina. E-mail:
mlvidoz@agr.unne.edu.ar, fax: +54-3783-427131.
Especie:
Arachis glabrata Benth., maní
perenne.
Vía
de regeneración: Embriogénesis somática
indirecta.
Establecimiento
de los cultivos:
a)
Explante utilizado: Los explantes se tomaron de hojas inmaduras (con aproximadamente
el 80% del tamaño final) provenientes de plantas adultas de cinco accesiones de
Arachis glabrata Benth. (A6138,
A6146, AF385, Lavia 5 y Lavia 6) que crecen en el jardín del
Instituto de Botánica del Nordeste (IBONE). Los mismos consistieron en porciones
de aproximadamente 4 mm2 de la parte central de láminas foliares,
incluyendo la nervadura media.
b)
Desinfección del explante: Las hojas fueron desinfestadas por
inmersión en etanol 70% durante 30 segundos, seguida por una inmersión en una
solución de NaOCl al 1% más una gota de TweenÒ durante 12
minutos. Posteriormente se realizaron tres lavados con agua destilada estéril.
c)
Medio de cultivo: Se utilizaron medios de cultivo compuestos por las
sales minerales, vitaminas y sacarosa de acuerdo con Murashige & Skoog
(1962) (MS), suplementados con diferentes concentraciones (2; 5; 8; 10 y 15
mg/L) de picloram (PIC) solo o combinado con 0,01 o 0,1 mg/L de
bencilaminopurina (BAP). El pH de los medios fue ajustado a 5,8 antes del
agregado de 0,7% de agar SigmaÒ (A-1296). Los
medios de cultivo fueron esterilizados en autoclave a 0,101 MPa durante 20
minutos. Los explantes fueron colocados sobre 3 cm3
de medio de cultivo en tubos de vidrio de 11 cm3 de capacidad, los
cuales se obturaron con Resinite AF 50.
Los
porcentajes más altos de embriogénesis somática fueron obtenidos al emplear 10
y 15 mg.L-1 de PIC, pero las respuestas fueron altamente dependientes del
genotipo.
Condiciones
de incubación: Los cultivos fueron incubados en un cuarto climatizado a
27 ± 2°C, con un fotoperíodo de 14 horas y una intensidad
lumínica de 116 µm.m-2.s-1.
Conversión de
los embriones somáticos:
Luego de 90
días en el medio de inducción, los embriones somáticos fueron transferidos
medios de cultivo compuestos por MS completo o diluido (1/2 y 1/4),
suplementado o no con carbón activado (CA). El más eficiente fue el constituido
por MS + CA 1 g/L durante 30 días, seguido por la transferencia de los
embriones a medios conteniendo MS, donde al cabo de aproximadamente 20 días
brindaron plantas.
Aclimatación:
Las
plántulas obtenidas fueron lavadas y plantadas en recipientes conteniendo un
sustrato formado por una mezcla de tierra, arena y turba (1:1:1). Las plantas
fueron aclimatadas en cámara húmeda en un cuarto climatizado a 27 ± 2°C, con un
fotoperíodo de 14 horas y una intensidad lumínica de 336 µm.m-2.s-1,
y luego fueron colocadas en un invernáculo.
Rendimiento
del protocolo:
Siguiendo
este protocolo se logró el 20% de embriogénesis somática en la accesión A6138.
El 6% de los embriones somáticos obtenidos regeneró plantas.
Observaciones:
Muchos
de los embriones fallaron en su conversión a plantas, y merced a los estudios
histológicos pudo constatarse que estos embriones tenían meristemas caulinares
deficientes. Esta anormalidad morfológica fue también encontrada en otras
especies de Arachis.
Bibliografía:
Vidoz, M. L.;
Rey, H.Y.; Gonzalez, A.M.; Mroginski, L.A. 2004. Somatic
embryogenesis and plant regeneration through leaf culture in Arachis glabrata (Leguminosae). Acta Physiologiae Plantarum 26 (1):
59-66.
Página
web: www.ibone.unne.edu.ar