Responsable de la elaboración de este Protocolo:
Hompanera, Norma R.
Instituto de Recursos
Biológicos, INTA, Castelar
Especie: Ipomoea batatas (L.) Lam (Batata, camote, boniato)
Vía de regeneración: Organogénesis
directa
Establecimiento de los
cultivos:
a) Explante utilizado
§ Yemas menores a 0.5 mm (meristemas), que se disectan
de yemas apicales o laterales
provenientes de plantas desarrolladas a partir de raíces plantados en
invernáculo.
b)
Desinfección del explante: alcohol
70º, 60 segundos e Hipoclorito de sodio 2%, 10 minutos.
c)
Medio de cultivo para el establecimiento:
Sales de
Murashige and Skoog (1962)
Mio-inositol
100 mg/l
Pantotenato
de Calcio 2 mg/l
Acido
Ascórbico 100 mg/l
Nitrato
de calcio 100 mg/l
L-Arginina
100 mg/l
Putrescina
HCL 20 mg/l
Acido
Giberélico 20 mg/l
Kinetina
0.4 mg/l
Sacarosa
50 g/l
Agar 7
g/l
pH: 5,7 previo a la adición del agar.
Condiciones de incubación: en cámara a 25 ºC, fotoperíodo 12 horas, Luz indirecta, aproximadamente 15 días.
Posteriormente, se repica, en un medio denominado de transferencia:
Sales de
Murashige and Skoog (1962)
Mio-inositol
100 mg/l
Pantotenato
de Calcio 2 mg/l
Acido
Ascórbico 100 mg/l
Nitrato
de calcio 100 mg/l
L-Arginina
100 mg/l
Putrescina
HCL 20 mg/l
Acido
Giberélico 15 mg/l
Sacarosa
50 g/l
Agar 7
g/l
b)
c)Condiciones de incubación: 25 º C, fotoperíodo
12 hs luz, 3000 lux.
a)
Explante: segmentos nodales con 3-4 nudos
b)
Medio de cultivo
Sales de
Murashige and Skoog (1962)
Thiamina
0.1 mg/l
Mio-inositol
100 mg/l
Sacarosa
30 g/l
Agar: 8
g/l
Condiciones de
incubación: 25 º C, fotoperíodo 12 hs luz, 3000 lux.
Enraizamiento: al cabo de 60 días, en el medio de
subcultivo y en las condiciones de incubación señaladas se obtienen plántulas, con un muy buen
desarrollo de raíces.
Aclimatación:
(procedimiento)
1- Extraer la plántula del tubo y lavar raíces para
eliminar restos de agar
2- Plantar en macetas con sustrato 3:1 tierra-turba. El
sustrato fue autoclavado a ½ atmósfera
durante 2 hs. y aireado antes de usar)
3- Colocar en cámara, con alta humedad relativa (90%),
24 hs de luz y alta intensidad (6000 luz). Temperatura 20ºC
Rendimiento de este
protocolo: datos de eficiencia,
La
menor eficiencia se obtiene en la introducción de material, que es alrededor de
un 50%. El las demás etapas, la eficiencia es prácticamente del 100%.
Observaciones:
-Como
nuestro objetivo es la conservación in vitro, cabe señalar que iniciamos los
cultivos a partir de la técnica de
meristemas, para asegurar una mayor sanidad de los materiales y una vez logrado
el establecimiento de los explantos, tratamos de no incluir hormonas, muchas
veces en detrimento de la tasa de
multiplicación.
Bibliografía:
Este
protocolo no fue publicado. Basado en lo publicado en la Guía de Investigación, CIP: 32, 1990, con algunas
modificaciones. En la introducción del explanto se eliminó el agua de coco y
fue incluída Kinetina y mioinositol. En micropropagación de materiales
obtenemos mejores explantos utilizando solo sales MS, mioinositol, thiamina y
Putrescina.
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