Responsable de la elaboración de este Protocolo:
Roxana
Enrico Laboratorio de
Investigaciones Ecológicas de las Yungas – Universidad Nacional de Tucumán, CC
34, 4107 Yerba Buena, Tucumán, Argentina. E-mail: roxyenrico@infovia.com.ar
Especie: Alnus acuminata H. B. K. ssp. acuminata, “aliso del cerro”, “aliso”, “jaúl”, “aliso blanco” Colocar nombre científico y
común
Vía de regeneración:Organogénesis directa
Establecimiento de los
cultivos:
a) Explante utilizado
Porciones de plántulas de 20 días, aproximadamente,
incluyendo epicótilos, nudo cotiledonar y 1-2 mm de hipocótilo.
b)
Desinfección del
explante:
Etanol 70% durante un minuto, luego NaOCl al 0,9%, con
dos gotas de TRITÓN-X100, durante 15 minutos y finalmente cuatro enjuagues con
agua destilada estéril.
c)
Medio de cultivo para el establecimiento :
Medio básico: Murashige y Skoog
(1962) (MS), diluido a la mitad de su concentración.
Etapa de Iniciación: MS/2, con 30 g/L de sacarosa y con 0,5 mM de ácido indolbutírico (IBA) y 1 mM de 6-bencilaminopurina (BAP). El pH de los medios fue ajustado, antes de la adición del agar (6 g/L) a 5,8. Duración: 35 días.
e)
condiciones de
incubación
Luz (116 mmol/m2/s, 14 hs de fotoperíodo) y
temperatura constante (27 ± 2ºC).
a)
Explante:
Explantes
desarrollados en la etapa anterior.
b)
Medio de cultivo:
Etapa de
Multiplicación: MS con vitaminas del B5 (Gamborg et al., 1968), con 1 mM de
BAP y 30 g/L de sacarosa. pH 5,8 y 6 g/L de agar. Duración de la etapa: 40
días.
c)
Condiciones de
incubación:
Luz (116 mmol/m2/s, 14 hs de fotoperíodo) y temperatura constante (27 ± 2ºC).
Enraizamiento:
a)
Medio de
cultivo:
MS/2, con las
vitaminas del B5, 87 mM de sacarosa y 1 mM de IBA. pH 5,8 y 6 g/L
de agar. Duración de la etapa: 30 días.
b)
condiciones de
incubación:
Luz (116 mmol/m2/s,
14 hs de fotoperíodo) y temperatura constante (27 ± 2ºC).
Aclimatación:
En hidroponía,
con solución de Arnon y Hoagland (1940) al 50%. Temperatura de 27 ± 2°C y
humedad relativa cercana al 100%.Los plantines así aclimatados fueron
inoculados con macerados de nódulos, provenientes de bosques naturales y
mantenidos a -20ºC, en el laboratorio.
Rendimiento de este
protocolo: datos
de eficiencia,
La tasa de
micropropagación fue de 7,2 ± 1,3
vástagos elongados por explante.
El
enraizamiento fue del 88% y la supervivencia cercana al 90% después de la
aclimatación, con respuesta positiva de la simbiosis.
Observaciones:
Bibliografía:
Enrico, R. J., S. S. Ramírez, L. A. Mroginski
and L.G. Wall, 2005. “In vitro plant regeneration of Alnus
acuminata H.B.K. ssp. acuminata and its root nodulation by Frankia”.
Plant Cell, Tissue and
Organ Culture 80: 343-346
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